Энтерококки в воде и почве

Энтерококки представляют собой бактерии семейства Enterococcaceae и относятся к санитарно-показательным микроорганизмам. С точки зрения физиологических особенностей они схожи со стрептококками. В кишечнике человека широко представлены два вида симбионтов – E. faecalis и E. faecium. Патогенные штаммы энтерококков могут вызвать ряд заболеваний, в том числе бактериальный эндокардит, менингит, а также нагноение ран. Некоторые из них отличаются устойчивостью к антибиотикам, среди которых пенициллин, цефалоспорин.

Уровень содержания энтерококков в водной среде строго регламентируется – так, для морской воды ПДК является значение 7 КОЕ/100 мл. Также уровень данных микроорганизмов отслеживается в мясе, рыбе и их производных. Энтерококки успешно применяются для более точной оценки качества продуктов. В зависимости от количества можно судить об уровне фекального загрязнения воды или почвы.

Физиолого-биохимическая характеристика

Энтерококки за счет имеющейся энергии брожения могут жить при недостатке или избытке кислорода, а также способны расти при температуре от 10 до 45 °C. Микроорганизмы отличаются устойчивостью к различным воздействиям внешних факторов. Например, они могут выдерживать нагрев до 60 °C на протяжении 30 минут, а также воздействие низкой температуры и процедуру высушивания.

Чем опасны энтерококки?

Энтерококки имеют по меньшей мере 20 видов, представляющих экологическое значение и способных долгое время выживать в почве и продуктах. В случае, если организм ослаблен другой болезнью, они могут атаковать разные органы и системы. В частности, микроорганизмы могут вызывать нарушение работы пищеварительной системы и органов, заболевания кожи, рта, носа, мочеполовых и желчных путей. При этом энтерококки, вопреки ошибочному мнению, не вызывают пищевую токсикоинфекцию, если при производстве продуктов их культура использовалась для получения особого, эксклюзивного вкуса и аромата. В качестве примера можно упомянуть сыр «чеддер».

Методы выявления

Анализ на энтерококки, которые представляют собой санитарно-показательные микроорганизмы, осуществляется для оценки состояния ключевых объектов среды – воды и почвы. Методы обнаружения энтерококков включены не только в государственные, но также в европейские и мировые стандарты.

В случае с жидкой средой на необходимость проведения анализов указывает помутнение с последующим образованием осадка. При этом методы, которые позволяют определить энтерококки в воде и почве схожи: в обоих случаях чаще всего используют титрационный метод и метод мембранной фильтрации.

Титрационный метод

Принцип титрационного метода основан на применении параллельных рядов посевов в щелочной полимиксиновой среде. В зависимости от предполагаемого уровня загрязнения воды кратность разведения может отличаться. Инкубирование осуществляется в течение суток при температуре 37 C с минимальной погрешностью. В случае, если рост присутствия в воде бактерий не наблюдается – это может выражаться в помутнении, изменении цвета среды – посевы остаются в термостате, а процесс инкубирования продлевается.

Для подтверждения принадлежности обнаруженной колонии к энтерококкам используется микроскопия.

1. Для проведения процедуры применяется 3% раствор перекиси водорода, капля которого наносится на колонию.
2. Если в течение минуты на стекле образуются пузырьки газа, это означает присутствие в образце искомого вещества.
3. Далее индекс энтерококков рассчитывается по таблицам.

В случае исследования пробы почвы подготавливаются разведения суспензии, которая перед этим проходит обязательную обработку. Далее при помощи стерильной пипетки берется 10 см³ и размещается по флаконам с 50 см³ жидкой среды – это может быть ЛПС или ЩЭС. Посевы инкубируются в условиях, которые идентичны исследованиям проб воды. При отсутствии признаков развития в первые 24 часа процесс продлевают на сутки.

Признаком наличия в образце микроорганизмов является появление небольших колоний c характерной структурой. С помощью данной среды можно вывести вид энтерококков. Е. faecalis – аспидно-черные выпуклые колонии, которые отличаются характерным блеском. Е. faecium – плоские колонии, имеющие серый оттенок.

Чтобы убедиться в наличии энтерококков во взятом образце почвы, проводится микроскопия окрашенных по Граму мазков, а также каталазное тестирование. В случае выявления энтерококков устанавливается титр с учетом предельного уровня разведения почвы, при котором были обнаружены колиформы. Чтобы перевести титр в индекс, достаточно 1000 разделить на число, которое выражает титр.

Метод мембранной фильтрации

Количество фильтруемой воды зависит от уровня предполагаемого загрязнения. Принцип самого метода предельно прост:

1. Образец проходит через фильтр мембранного типа в асептических условиях, а он в свою очередь удерживает микроорганизмы, содержащиеся в пробе.
2. Далее фильтр помещается в чашку Петри и инкубируется в течение одного-двух дней при идентичной вышеописанному методу температуре.
3. В случае обнаружения присутствия колоний энтерококков подсчитывается их количество, после чего они суммируются и делятся на объем воды, которая подвергалась фильтрации.

Особенность исследования почвы в данном случае схожа с анализом пробы воды. Однако, при выборе объема анализируемого образца необходимо учитывать, что на 2-х и больше фильтрах должно вырасти от 5 до 50 изолированных колоний. Выполнение анализа производится с помощью мембранных фильтров, сквозь которые проходит испытуемый образец. Для инкубирования при температуре 37 °C отводится 24-48 часов – продолжительность зависит от степени развития колоний.

Стоит отметить, что для установления получаемых результатов используются фильтры, на которых было выращено не больше 20-30 колоний. Выделение из них энтерококков определяется по ключевым признакам – они могут быть плоскими и крупными с ровными краями, а также иметь характерный оттенок: белый, бледноокрашенный, кремовый и даже малиновый. Последний свидетельствует о присутствии E. faecalis. Для подтверждения наличия энтерококков производится микроскопирование 2-3 колоний каждого типа.

Важность правильного отбора проб

Даже новейшее оборудование и соблюдение всех правил во время анализа не гарантирует получение точной информации, если при отборе образца были допущены нарушения. Специалисты лаборатории «НОРТЕСТ» учитывают это, отбирая воду или почву для исследований. Помимо соблюдения необходимых правил, мы также обеспечиваем безопасную доставку образца, что позволяет рассчитывать на высокую точность результатов при проведении анализа.

Услуга анализа воды и почвы в лаборатории «НОРТЕСТ»

Испытательный центр «НОРТЕСТ» является аккредитованной организацией и имеет все необходимые разрешения для выполнения комплексных задач по оценке и анализу исследуемых объектов. Наша лаборатория оснащена современным оборудованием, что позволяет реализовывать передовые методики и рассчитывать на минимальную погрешность при проведении исследований. Наша задача – предоставление аналитических услуг высшего качества, поэтому своевременное обращение в центр позволит определить характер и серьезность загрязнений среды и предпринять шаги по устранению проблем.